Сравнительная оценка активности составляющих препаратов Полижинакс и Тержинан in vitro

На сегодняшний день антибактериальная терапия с применением комбинированных антибактериальных препаратов (АБП) показана в следующих клинических ситуациях:

• при наличии микобактериальной инфекции;
• инфекций, ассоциированных с синегнойной палочкой;
• бактериальных инфекций с вероятностью развития резистентности к АБП;
• в связи с необходимостью расширения спектра действия АБП при лечении тяжелых и микробиологически незадокументированных инфекций (Courvalin et al., 2008).

В данной статье представлены материалы заключительного отчета лабораторного исследования активности двух АБП и одного противогрибкового препарата в отношении 17 видов бактерий и штаммов Candida. Для этого было проведено исследование (ноябрь 2008) с целью оценки антимикробной эффективности комбинаций нескольких действующих веществ на примере лекарственных препаратов, используемых в гинекологической практике. В частности, обзор посвящен исследованию активности двух антибиотиков (неомицина сульфата и полимиксина В сульфата) и одного фунгицидного препарата (нистатина) как в отдельности, так и в комбинации на примере препарата Полижинакс в сравнении с аналогичным препаратом Тержинан различных производителей. Препарат Тержинан, произведенный во Франции (Bouchara-Recordati), содержит комбинацию нистатина и двух антибиотиков (неомицина сульфата и метронидазола). Тержинан российского производства вместо метронидазола содержит тернидазол, и кроме того, в его состав входит глюкокортикоид (преднизолон).

Авторы исследования задались целью оценить эффективность готовых к использованию комбинаций противогрибкового препарата и АБП, используемых в гинекологической практике для местного лечения вагинитов, ассоциированных с чувствительными микроорганизмами, а также для лечения неспецифического вагинита. При бактериальных вагинозах в качестве возбудителей также могут обнаруживаться бактерии (Staphylococcus aureus, Streptococcus B, Escherichia coli, Proteus).

Целью исследования являлось определение эффективности всех трех составляющих лекарственного средства Полижинакс как по отдельности, так и в комбинации. Кроме того, был протестирован другой лекарственный препарат – Тержинан.

Материалы и методы исследования

Эффективность изучаемых препаратов была исследована в отношении следующих штаммов микроорганизмов: Klebsiella pneumoniae, E. coli, Enterobacter aerogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Salmonella enteritidis, Shigella spp., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus meti-S (MSSA), Staphylococcus aureus meti-R (MRSA), Streptococcus A, Streptococcus B, Enterococcus hirae, Corynebacterium amycolatum, Gardnerella vaginalis. Большинство из этих штаммов бактерий, а также штаммы дрожжей Candida albicans, Candida glabrata были получены из патологических образцов. Исследовали действие антибактериальных и противогрибкового препаратов неомицина сульфата, полимиксина В сульфата и нистатина. Активность комбинации вышеуказанных действующих веществ определялась на примере следующих лекарственных средств.

• Полижинакс: неомицина сульфат – 35 000 МЕ (51,4 мг), полимиксина В сульфат – 35 000 МЕ (4,6 мг) и нистатин – 100 000 ЕД (17,7 мг).
• Тержинан (Франция)*: метронидазол – 500 мг, неомицин – 65 000 МЕ (95,5 мг), нистатин – 100 000 ЕД (17,7 мг).
• Тержинан (Россия)**: тернидазол – 200 мг, неомицин – 65 000 МЕ (95,5 мг), нистатин – 100 000 ЕД (17,7 мг). Кроме того, этот лекарственный препарат содержит глюкокортикоид (3 мг преднизолона).

Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) определяли при посеве на агар. Серии разведений антибиотиков были помещены в чашки Петри для смешивания с питательной средой. На поверхность агара в каждой чашке Петри были нанесены линии исследуемых штаммов стандартным методом посева. МИК определяли по самой низкой концентрации антибиотика, которая препятствовала видимому росту микроорганизмов в течение одной ночи.

Для определения МИК капсулы и/или таблетки исследуемого препарата растворяли и разбавляли водным раствором соли таким образом, чтобы диапазон концентраций неомицина соответствовал таковым, которые использовались для определения МИК антибиотиков по отдельности.

Одну капсулу Тержинана растворили в 74,3 мл водного раствора соли. Концентрации других антибактериальных веществ были рассчитаны в соответствии с их содержанием в капсулах и/или таблетках.

Тержинан (Франция):

• конечная концентрация неомицина – 1285 мг/л;
• конечная концентрации нистатина – 238,2 мг/л;
• конечная концентрация метронидазола – 6729,5 мг/л.

Тержинан (Россия):

• конечная концентрация неомицина – 1285 мг/л;
• конечная концентрации нистатина – 238,2 мг/л;
• конечная концентрация тернидазола – 2691,8 мг/л.

Диапазоны испытуемых концентраций полимиксина В и неомицина в виде порошка – от 128 до 0,5 мг/л.

Полижинакс:

• неомицин – 128,5-0,5 мг/л;
• полимиксин В – 11,5-0,05 мг/л;
• нистатин – от 44,25-0,18 мг/л.

Тержинан (Франция):

• неомицин – 128,5-0,5 мг/л;
• нистатин – 23,8-0,18 мг/л;
• метронидазол – 673-2,6 мг/л.

Тержинан (Россия):

• неомицин – 128,5-0,5 мг/л;
• нистатин – 23,8-0,18 мг/л;
• тернидазол – 269,2-1,1 мг/л.

Все манипуляции проводились дважды, и значение МИК было указано как высшее из двух полученных.

Результаты исследования

Нами были выявлены критические концентрации чувствительности бактериальных штаммов к антибиотикам в соответствии с определением Французского сообщества микробиологов («Французский комитет по антибиотикограммам», 2008):

• неомицин ≤ 8 S, > 16 R;
• полимиксин ≤ 2 S, > 2 R;
• метронидазол ≤ 4 S, > 16 R.

Неомицин – антибиотик из группы аминогликозидов. Он подавляет синтез белка, вызывает нарушения в транскрипции генетического кода и обусловливает гибель микробных клеток. Как правило, к нему чувствительны аэробные бактерии (C. amycolatum, Listeria и MSSA), что было доказано в эксперименте. Кроме того, определяли чувствительность грамотрицательных бактерий, в т.ч. P. aeruginosa, обычно резистентной к этому антибиотику. В то же время устойчивость MRSA и грамотрицательных кокков (стрептококки и энтерококки) соответствовала изученному спектру действия неомицина.

Полимиксин В относится к группе полипептидных антибиотиков. Его действие направлено на цитоплазматическую мембрану бактериальной клетки. Из испытуемых штаммов только E. coli, K. pneumoniae и Enterobacter оказались к нему чувствительны. В отношении остальных штаммов была выявлена резистентность к препарату. В частности, речь идет о грамположительных бактериях, что соответствует известному спектру действия полимиксина B.

Нистатин – противогрибковый препарат полиенового ряда. Он связывается с эргостеролом, основным компонентом клеточной оболочки грибка, оказывая повреждающее действие на мембрану и приводя к его гибели. Оба испытуемых штамма дрожжей C. albicans и C. glabrata оказались чувствительны к этому противогрибковому препарату. Вместе с тем бактерии были резистентны к нему, что неудивительно, поскольку нистатин не оказывает влияния на прокариотические микроорганизмы.

Метронидазол – производное нитроимидазола. Он действует на анаэробные микроорганизмы (за некоторым исключением), G. vaginalis (которая является факультативным анаэробом) и внутриклеточные паразиты, такие как Trichomonas vaginalis.

Результаты тестирования лекарственных средств (угнетение роста культуры бактерий), представляющих собой комбинации различных антибиотиков, даны в таблице:

. В случае, когда концентрация комплексных препаратов была ниже, чем МИК одного из АБП – штамм считался чувствительным к комбинации всех трех АБП (отмечено зеленым цветом). В противном случае штамм считался резистентным (отмечено красным цветом).

Антибактериальный спектр Полижинакса соответствовал таковому для неомицина, полимиксина и нистатина по отдельности. Кроме того, был определен пороговый уровень чувствительности G. vaginalis к неомицину и резистентность к полимиксину B. При тестировании Полижинакса в двух экспериментах отмечался пороговый уровень эффективности: в одном доказана эффективность, в другом – не выявлено противомикробной активности. Также не отмечено ни синергического, ни антагонистического действия в отношении трех компонентов препарата Полижинакс.

Спектр действия Тержинана (как французского, так и российского производства) был таким же, как и препарата Полижинакс, за исключением того, что первый оказался более активен в отношении G. vaginalis. Результаты исследования показали, что S. aureus (MRSA), стрептококки и энтерококки нечувствительны к Тержинану.

Выводы

Определяемые в нашем исследовании MИК являются только теоретическими, однако они позволяют продемонстрировать спектр действия антибиотиков в отношении разных штаммов бактерий как по отдельности, так и в комбинации. Результаты исследования соответствуют ранее опубликованным данным литературы.

• Неомицин действует преимущественно на грамотрицательные бактерии и не влияет на грамположительные, кроме метициллинчувствительных стафилококков и C. amycolatum. Он также активен в отношении G. vaginalis.
• Полимиксин В проявляет активность относительно грамотрицательных бактерий, таких как K. pneumoniae, E. coli, E. aerogenes и Shigella spp. Он не оказывает действия на грамположительные микроорганизмы, так как воздействует только на наружную мембрану клетки.
• Нистатин действует только на эукариоты (дрожжи, такие как C. albicans и C. glabrata).

Кроме того, МИК, определяемые в нашем исследовании, демонстрируют комбинированное действие антибиотиков в их оригинальной концентрации в составе комплексного лекарственного препарата.

Полижинакс. Спектр действия препарата Полижинакс соответствует активности действующих веществ в его составе. Прежде всего, речь идет о неомицине, который активен в отношении S. aureus (MSSA), Streptococcus, Enterococcus, а также грибов рода Candida.

Тержинан. Антибактериальный спектр действия препаратов Тержинан (Россия) и Тержинан (Франция) несколько отличается. Это объясняется наличием метронидазола в составе препарата французского производства или тернидазола российского производства. Оба препарата показали высокую активность в отношении G. vaginalis. В отношении T. vaginalis исследования не проводились. Спектр действия Полижинакса идентичен Тержинану, за исключением того, что не выявлено действия Тержинана на S. aureus, стрептококки и энтерококки. Последний оказался более активным в отношении G. vaginalis.

Полученные результаты продемонстрировали, что концентрации действующих веществ в препаратах для местной терапии (но не для перорального приема) выше токсических концентраций, определяющих развитие резистентности к антибактериальному компоненту. При таких условиях возможно, что штаммы возбудителя, теоретически устойчивые к действующему веществу, будут подавляться его высокими концентрациями. Кроме того, существует вероятность того, что эти высокие концентрации могут оказывать синергичное влияние на возбудителя, которое по спектру действия более широкое, нежели у каждого действующего вещества по отдельности.

* По требованию Французского агентства по безопасности лекарственных средств (AFSAPS) на территории Европы препарат Тержинан зарегистрирован в составе: неомицин, нистатин, метронидазол без гормонального компонента – преднизолона. Vidal (Франция), 2012 г.
** Описание состава лекарственного препарата Тержинан основано на официально утвержденной инструкции по применению препарата Тержинан на территории России для специалистов и утверждено компанией-производителем для издания Vidal (Россия), 2011 г. В состав входят: неомицин, нистатин, тернидазол, преднизолон.